Fichamento 2

Aplicações da Biologia Molecular na Odontologia: Conceitos e Técnicas

SILVA, FB; SOUSA, SMG

“A análise molecular é um novo método de avaliação que busca as alterações expressas em nível genético, ou seja, pelo DNA. O DNA genômico é obtido de qualquer material biológico, mas as amostras mais utilizadas são sangue (leucócitos), tecidos biopsiados (células residentes), fluido amniótico e vilosidade coriônica. Para extrair o DNA do núcleo celular, são necessárias várias etapas, que compreendem lise celular, extração das proteínas e do RNA, precipitação do DNA, até a purificação. O DNA obtido será digerido por enzimas de restrição que produzem muitos fragmentos de DNA do gene em estudo.”

“A eletroforese em gel de agarose ou depoliacrilamida é um método simples e rápido que separa o DNA em fragmentos de tamanhos diferentes usando enzimas de restrição. Quando submetidas a um campo elétrico(matriz) em pH neutro, as moléculas de DNA são atraídas para o pólo positivo e repelidas do pólo negativo.”

“Depois de obtidos os fragmentos de DNA no gel, um certo segmento do DNA que contém o gene de interesse pode ser detectado pela hibridização com uma sonda específica. Para isso, o DNA contido no gel é transferido para um filtro de nitrocelulose ou náilon por meio do método de transferência chamado Southern blotting. Quando o material presente no gel é RNA, o método chama-se Northern blotting e, caso seja proteína, denomina-se Western blotting. Após ser fotografado em UV, o gel é mergulhado em solução de hidróxido de sódio, ocasionando a desnaturação da dupla fita de DNA.”

“Como resultado, observamos na auto-radiografia um padrão com uma ou mais bandas, indicando o número e o tamanho dos fragmentos de DNA complementares à sonda.”

“A microbiologia bucal é essencial para a identificação e caracterização de vários microrganismos envolvidos nas infecções bucais. A bolsa periodontal tem cerca de 300 espécies diferentes de bactérias. Alguns microrganismos têm sido associados com a doença periodontal, como Actinobacillus actinomycetemcomintans  (Aa),  Fusobacterium nucleatum (Fn), Porphyromonas gingivalis (Pg), Prevotella intermédia (Pi) e Eikenella corrodens(Ec). Muitos métodos têm sido usados na detecção da variação fenotípica e genotípica para a caracterização desses patógenos periodontais, assim como na identificação de bactérias da cavidade bucal. Por meio dessas técnicas, o patógeno pode ser diagnosticado antes que a doença esteja em estado avançado, sendo possível identificar, simultaneamente, mais de um patógeno.”